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第九十六期 單抗、病毒、疫苗純化新神器--東曹TOYOPEARL Sulfate-650F

2017年07月27日source:管理員
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一、TOYOPEARL Sulfate-650F的簡介

1. 帶有硫酸根官能團的陽離子交換填料

? 官能團為硫酸根(SO4-) ,S-SP-CM-等類型相似,同為陽離子交換填料。

? 對抗體等蛋白有很高的吸附載量。


2.
可有效去除抗體中的多聚體

? 相較于其他陽離子交換填料,對多聚體有著更高的分離效果。

? pH低于5.0、并含有0.15 mol/LNaCl緩沖液中仍然可以結合抗體,具有耐鹽性。

? 可作為Protein A層析的后續純化步驟。


3.
有類似于肝素親和填料的分離純化效果

? 可以應用于AT-III和其他相關蛋白的分離純化。

? 有望應用于病毒和疫苗的分離純化。


4.
適用的緩沖液pH范圍

? 一般可以用于pH 4-12的緩沖液中。

? 可以用pH 3-13的清洗液進行短時間的CIP處理。

二、TOYOPEARL Sulfate-650F的基本參數

性能指標

規格參數

蛋白吸附載量

靜態

動態

114g/L(human IgG)

95g/L

離子交換容量

0.53eq/L

粒徑

80%(30-60μm)

菌落總數

100 CFU/ml

內毒素等級

10.0 EU/ml

不溶物

0.2%(干膠)

異物(colored

6 顆粒

出貨溶劑:含0.2mol/L醋酸鈉的20%乙醇溶液


三、
TOYOPEARL Sulfate-650F適用樣品


? 單克隆抗體

? 血漿蛋白、凝血因子

? 病毒、VLP、疫苗

? 重組蛋白

? 堿性蛋白

四、TOYOPEARL Sulfate-650F的主要特點


? 高載量

? 多聚體分離

? 耐鹽的陽離子交換填料

? 與肝素親和作用相似(硫酸根官能團)

五、TOYOPEARL Sulfate-650F的應用條件


1. 單克隆抗體多聚體的分離純化

? IgG可達到100 g/L的高載量。

? 可以作為Protein A親和層析的后續純化步驟。


2.
pH 5 以下具有耐鹽性

? pH 4.7、0.15 mol/L NaCl的緩沖液中可以對樣品進行吸附。

? Protein A 親和層析或前處理后可以直接進行上樣。


3.
硫酸根官能團的特異性相互作用

? 與肝素親和層析相似,可以與凝血因子、疫苗或病毒結合。

? 可以用0-1 mol/LNaCl進行鹽梯度洗脫。

? 與競爭對手的Sulfate填料具有類似的吸附性能,但是Sulfate-650F具有更高的吸附載量(某些填料由于孔徑小,所以蛋白只能結合在填料的表面)。


4.
常用的分離條件

? 上樣緩沖液的pH要控制在5.5以下。

? 優化緩沖液的pH和鹽濃度能夠獲得更好的分離效果。

? 當緩沖液的pH4.2時,即使在0.3mol/LNaCl的緩沖液中也能夠獲得很高的吸附載量。


六、多種不同的陽離子交換填料對單體和多聚體的分離度比較





pH 5.5的緩沖液中,mAb單體和多聚體回收率的比較


七、
TOYOPEARL Sulfate-650F在類似于肝素親和填料方面的應用展望

1. 類似于肝素親和填料的分離純化作用*

? 凝血因子:Factor VII、Factor IX、Factor X、凝血酶、AT-III

? 組織纖溶酶原激活物(TPA

? 脂肪酶、核酸酶有關(如限制性內切酶)、膠原酶、脂蛋白


2. 利用硫酸根官能團的相互作用*

? 病毒、疫苗

*目前使用TOYOPEARL Sulfate-650F純化的除了核糖核酸酶AAT-III以外,暫時沒有其他實例。


八、單克隆抗體純化工藝實例

實例1.



實例2.



實例3.



九、訂貨信息

貨號

描述

023468

TOYOPEARL Sulfate-650F, 250ml

023469

TOYOPEARL Sulfate-650F,1L

023470

TOYOPEARL Sulfate-650F,5L

023471

TOYOPEARL Sulfate-650F,50L

023472

ToyoScreen Sulfate-650F, 1ml×6

023473

ToyoScreen Sulfate-650F, 5ml×6



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