產品介紹
AMBERCHROMTM XT系列樹脂是聚合物反相填料,其基質是聚苯乙烯-二乙烯基苯。它是現有的AMBERCHROMTM CG系列的改良產品,提供了更好的耐壓性,改善了分離效果,對于苛刻的在位清洗(CIP)程序也依然很穩定。
AMBERCHROM? XT系列樹脂可用于生物分子的純化,對于使用者來說,在反相色譜實驗中,相對于硅膠,它提供了一個更為經濟的選擇。AMBERCHROM? XT系列樹脂在分離純化疏水和極性的多肽、小分子蛋白和寡核苷酸上性能優越。它很適合分離治療性的蛋白質,如胰島素。
由于填料優異的pH穩定性,它可以分離純化大多數的多肽和寡核苷酸,這就意味著可以用較少的投入獲得較大的收益。在分離的時候,AMBERCHROM? XT系列樹脂可以提供高產率,由于它優越的剛性,可以使用在中壓系統上,耐壓60bar。
優秀的pH穩定性
和反相硅膠填料不同,由于AMBERCHROM? XT樹脂是聚合物基材,沒有氫鍵作用,它可以在pH 1~14的范圍內使用和清洗。圖1說明,使用1.0M NaOH作為在位清洗試劑,在經過70次循環清洗后,AMBERCHROM? XT樹脂的保留性沒有發生改變。
較高的處理能力
從圖2中可以看出,AMBERCHROM? XT樹脂和硅膠產品的性能相近。聚合物基材的AMBERCHROM? XT樹脂可以對目標分離提供更高的效率。
AMBERCHROM? XT樹脂對于寡核苷酸的分離,性能良好。以下表1列出了AMBERCHROM? XT系列樹脂的物理特性。使用一支1cm×25cm裝有AMBERCHROM? XT樹脂填料的色譜柱,只需要一步就可以分離純化20-聚體的寡核苷酸。具體步驟是:未完全去保護的天然胸苷,處理后上柱子洗脫。使用陰離子交換色譜進行純度測定。
良好的機械穩定性
一般情況下,聚合物基質的樹脂其剛性都不足以承受高壓,進而不適合用于高效液
相色譜儀。
獨特的選擇性
AMBERCHROM? XT樹脂的另一個優點,就是它的獨特的選擇性。下圖說明,4種血管緊張素在裝有AMBERCHROM? XT樹脂填料的柱子上可以完全分離開,而其他的硅膠基質的樹脂很難做到完全分離。
對疏水和極性的多肽顯現出良好的分離性能
萬古霉素,一種疏水的環形多肽,作為一個典型的例子,證明AMBERCHROM? XT樹脂的分離性能在堿性pH條件下有著明顯的改善。當純化過程在pH 2.0的條件下進行時,AMBERCHROM? XT樹脂表現出典型的反相洗脫模式。
但是,當AMBERCHROM? XT樹脂在pH 8.0堿性緩沖溶液的條件下使用時,其分離性能提高一倍,洗脫和純化的能力較傳統工藝有了明顯的改善。
對萬古霉素(Sigma,USP 級,MW 1485)的精提步驟進行了改良。上樣時的純度約為89%。進行提純制備時,在兩個不同的pH條件下,使用一支裝有AMBERCHROM? XT系列樹脂填料的1cm×25cm的色譜柱。色譜條件是:3%~25%的乙腈進行線性的梯度洗脫。隨著pH值的增大,純化效果越來越好。這說明,對于改善純化效果來說,填料有較寬泛的pH穩定性是有必要的。
在堿性條件下,萬古霉素表現出疏水分子的特性,AMBERCHROM? XT系列樹脂填料的動態載量翻倍。這說明了具有寬泛pH范圍的聚合物基質樹脂的另一個優點。
優越的動態載量
同競爭產品相比,AMBERCHROM? XT樹脂對寬泛的分子量范圍的分子有著優越的動態載量。表2給出了萬古霉素(MW 1485)、牛胰島素(MW 5600)和溶解酵素(MW 14000)的動態載量值。測試使用的條件是0.1% TFA緩沖溶液,線性流速153cm/h。
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結 論
AMBERCHROM? XT反相樹脂填料特點如下:
?? 對生物大分子的載量高;
?? 機械性能穩定;
?? 比硅膠基質的樹脂pH 應用范圍廣;
?? 效率高,選擇性獨特;
?? 對于多肽和寡核苷酸的分離載量大;
?? 是分離疏水和極性的多肽的理想介質;